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Bio-techne|「资深玩家」适用的 DuoSet® ELISA,选对「辅助」很重要

Bio-Techne 的 ELISA 试剂盒家族阵容强大,简直是神仙打架:既有享誉业界的金标准 Quantikine® 系列,又有性价比之王 Valukine® 系列,还有为 ELISA 高手量身打造的 DuoSet® 系列。

一、DIY 你的专属 ELISA 试剂盒

说起 DuoSet® 系列,其属于开发型 ELISA 试剂盒,适合动手能力强、经验丰富的 ELISA「资深玩家」,特别适用于在各种不同平台上进行免疫学实验开发设计,为研究者提供极为经济、灵活、快捷的方案。DuoSet® ELISA 试剂盒的组分包括:捕获抗体、生物素化检测抗体、校正的蛋白标准品、链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)。

与包含 ELISA 实验所有必需试剂的即用型 Quantikine® ELISA 试剂盒不同,DuoSet® ELISA 试剂盒验证了细胞培养上清的样本,如需检测含有复杂基质的样本(如血清和血浆等),则需要进一步优化。

 

二、如何选择 DuoSet 的黄金搭档

那么要顺利开展完整的 ELISA 实验,DuoSet® ELISA 试剂盒需要搭配哪些附属试剂?我们的产品说明书提供了详细信息。

在说明书的「Other Materials & Solutions Required」部分,会提示需要搭配哪些试剂,产品页面也会给出建议搭配的附属试剂(请参考下图)。大部分 DuoSet® ELISA 试剂盒可以直接购买成套的辅助试剂盒,例如 DY007、DY008、DY009 等。

如果你有较长时间的 ELISA 开发经验,可自行配制一套合适的附属试剂。如果你是初次接触 DuoSet® ELISA 试剂盒,附属试剂的配制又稍显繁琐,这时我们还是推荐使用 DY007、DY008 或 DY009 作为起步,因为这些附属试剂盒均已经过验证,适用于 ELISA 实验。

 

此外附属试剂盒的组分也可单独出售。例如:DY008 由以下试剂组成,每种试剂均可单独购买:

  • ELISA Plate-Coating Buffer,DY006;
  • Stop Solution,DY994;
  • Substrate Reagent Pack (8 vials Color A, 8 vials Color B),DY999;
  • Wash Buffer Concentrate,WA126;
  • Clear Polystyrene Microplates,25 pack,DY990;
  • ELISA Plate Sealer,100 Pack,DY992;
  • Reagent Diluent Concentrate 2 (10X, 5x21 mL),DY995。
     

为什么有必要提及附属试剂?我们举个来自用户的例子,体现附属试剂的重要性:

下表中显示,用户使用 cat# DY450:Mouse CCL3/MIP-1 alpha DuoSet ELISA 和自行组配的附属试剂,得到的标准品 OD 值(450 nm 的测定值减去 570 nm 的测定值)。可以看到,全部标准品 OD 值(包括未加标准品 0 值孔)均出现高的显色,无梯度。

 

经过问题排查,我们推测可能是附属试剂牛血清白蛋白(BSA)造成的影响。实际上,几乎所有的 BSA 制剂中都会发现不同程度的杂质,例如蛋白酶、结合蛋白、可溶性受体或其他干扰物质,会抑制或干扰某些分析物的检测。

我们推荐使用 fraction V(第五组分),无蛋白酶的 BSA,例如 Reagent Diluent Concentrate 1 或 2(货号 DY995,DY997)。后续用户使用 DY008 附属试剂盒替代之前的附属试剂,重新实验,结果恢复正常。

不仅是 BSA,任何一种附属试剂出现问题,都可能对 ELISA 结果造成极大的影响。所以,如果您希望尽快的开展 DuoSet®  ELISA 实验,推荐以 DY007、DY008、DY009 为起点开始尝试,一步步进阶大神。

 

以上文字和图片来源于Bio-techne

 

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